酶標(biāo)儀的原理

更新時(shí)間：2015-08-26 點(diǎn)擊次數(shù)：2718

酶標(biāo)儀實(shí)際上就是一臺(tái)變相的光電比色計(jì)或分光光度計(jì)，其基本工作原理與主要結(jié)構(gòu)和光電比色計(jì)基本相同. 圖示是一種單通道自動(dòng)進(jìn)樣的酶標(biāo)儀工作原理圖.光源燈發(fā)出的光波經(jīng)過(guò)濾光片或單色器變成一束單色光，進(jìn)入塑料微孔極中的待測(cè)標(biāo)本.該單色光一部分被標(biāo)本吸收，另一部分則透過(guò)標(biāo)本照射到光電檢測(cè)器上，光電檢測(cè)器將這一待測(cè)標(biāo)本不同而強(qiáng)弱不同的光信號(hào)轉(zhuǎn)換成相應(yīng)的電信號(hào).電信號(hào)經(jīng)前置放大，對(duì)數(shù)放大，模數(shù)轉(zhuǎn)換等信號(hào)處理后送入微處理器進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和計(jì)算，zui后由顯示器和打印機(jī)顯示結(jié)果. 微處理機(jī)還通過(guò)控制電路控制機(jī)械驅(qū)動(dòng)機(jī)構(gòu)X方向和Y方向的運(yùn)動(dòng)來(lái)移動(dòng)微孔板，從而實(shí)現(xiàn)自動(dòng)進(jìn)樣檢測(cè)過(guò)程.而另一些酶標(biāo)儀則是采用手工移動(dòng)微孔板進(jìn)行檢測(cè)，因此省去了X,Y方向的機(jī)械驅(qū)動(dòng)機(jī)構(gòu)和控制電路，從而使儀器更小巧，結(jié)構(gòu)也更簡(jiǎn)單.

微孔板是一種經(jīng)事先包理于放置待測(cè)樣本的透明塑料板，板上有多排大小均勻一致的小孔，孔內(nèi)都包埋著相應(yīng)的抗原或抗體，微孔板上每個(gè)小孔可盛放零點(diǎn)幾毫升的溶液.

光是電磁波，波長(zhǎng)100nm～400nm稱為紫外光，400nm～780nm之間的光可被人眼觀察到，大于780nm稱為紅外光。人們只所以能夠看到色彩，是因?yàn)楣庹丈涞轿矬w上被物體反射回來(lái)。綠色植物之所以是綠色，是因?yàn)橹参镂盏拇蟛糠譃榧t橙光和藍(lán)紫光，但對(duì)綠色不吸收，反射出來(lái)，所以植物呈現(xiàn)為綠色。酶標(biāo)儀測(cè)定的原理是在特定波長(zhǎng)下，檢測(cè)被測(cè)物的吸光值。

檢測(cè)單位

光通過(guò)被檢測(cè)物，前后的能量差異即是被檢測(cè)物吸收掉的能量，特定波長(zhǎng)下，同一種被檢測(cè)物的濃度與被吸收的能量成定量關(guān)系。

檢測(cè)單位用OD值表示， OD是optical density（光密度）的縮寫(xiě)，表示被檢測(cè)物吸收掉的光密度， OD=1og（1/trans），其中trans為檢測(cè)物的透光值。根據(jù)Bouger-amberT-beer法則，OD值與光強(qiáng)度成下述關(guān)系：

E=OD=logΙ0/Ι 其中E表示被吸收的光密度， Ι0 為在檢測(cè)物之前的光強(qiáng)度，Ι為從被檢測(cè)物出來(lái)的光強(qiáng)度。

OD值由下述公式計(jì)算：E=OD=C×D×E

C為檢測(cè)物的濃度 D為檢測(cè)物的厚度 E為摩爾因子

在特定波長(zhǎng)下測(cè)定每一種物質(zhì)都有其特定的波長(zhǎng)，在此波長(zhǎng)下，此物質(zhì)能夠吸收zui多的光能量。如果選擇其它的波長(zhǎng)段，就會(huì)造成檢測(cè)結(jié)果的不準(zhǔn)確。因此，在測(cè)定檢測(cè)物時(shí)，我們選擇特定的波長(zhǎng)進(jìn)行檢測(cè)，稱為測(cè)量波

長(zhǎng)。

但是每一種物質(zhì)對(duì)光能量還存在一定的非特異性吸收，為了消除這種非特異性吸收，我們?cè)龠x取一個(gè)參照波長(zhǎng)，以消除這個(gè)不準(zhǔn)確性。在參照波長(zhǎng)下，檢測(cè)物光的吸收zui小。檢測(cè)波長(zhǎng)和參照波長(zhǎng)的吸光值之差可以消除非特異性吸收。